肺癌是全球癌症发病率和死亡率最高的原因，组织学上分为两种亚型：非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC），分别占肺癌病例的85%和15%。KRAS是NSCLC中最常见的RAS基因突变亚型。RAS突变经常损害其GTP酶活性，将蛋白质构象锁定在GTP结合状态，并导致下游信号的持续激活，最终导致恶性转化和转移。

　　KRAS突变在非小细胞肺癌（NSCLC）中频繁检测到。尽管已经开发了共价结合的KRASG12C用于治疗KRASG12C突变的癌症，但对其他KRAS突变的NSCLC仍缺乏有效的治疗方法。因此，识别赋予KRAS突变癌细胞侵袭性表型的新型可靶的KRAS效应因子，将为KRAS相关癌症的治疗提供另一种策略。

　　泛素化是一种常见的蛋白质修饰类型，其中在泛素激活酶（E1）、泛素连接酶（E2）和泛素连接酶酶（E3）的催化下，泛素（Ub）分子以共价键形式附着到底物蛋白的赖氨酸残基的ε-氨基基团上。去泛素化酶（DUBs）是一类酶，它们催化将泛素链从靶蛋白上移除，并在调节蛋白稳定性、亚细胞定位、酶活性等方面发挥关键作用。泛素特异性蛋白酶13（USP13）是DUBs的泛素特异性蛋白酶（USP）亚家族的成员，它参与调节多种细胞功能。

　　为筛选出有效的USP13，研究人员采用了与泛素结合的7-酰胺基-4-甲基香豆素（AMC-Ub）作为底物，该底物可被广泛的DUB水解，如USP13，产生AMC荧光团。在重组USP13和AMC-Ub的培养基中孵育后，USP13活性与AMC荧光强度呈正相关。利用这个检测体系，筛选了一个天然化合物库，发现2-甲氧基雌二醇可以剂量依赖性地抑制USP13引起的AMC释放。2-甲氧基雌二醇对USP13的抑制效力与Spautin-1相当。研究人员使用K63-联锁四泛素（K63-Ub4）作为底物，进一步确认2-甲氧基雌二醇是否能够抑制USP13对K63-联锁多泛素化的催化活性。

　　研究人员检测到2-甲氧基雌二醇显著抑制了USP13介导的K63-Ub4的裂解。微量热传导（MST）结合实验显示，当2-甲氧基雌二醇与GFP-USP13共同孵育时，存在强有力的结合曲线，而与GFP单独蛋白共同孵育时则没有。然而，USP132-甲氧基雌二醇对于抑制KRAS突变非小细胞肺癌细胞的生长并不如全K-RASBAY293或G12CSotorasib有效，并且在抑制具有KRAS突变的NSCLC细胞的侵袭能力方面，2-甲氧基雌二醇表现更加优异。

　　研究人员评估了2-甲氧基雌二醇是否能够通过靶向USP13来抑制KRAS突变癌细胞的侵袭能力。转移试验显示，2-甲氧基雌二醇能够强烈地降低携带KRASG12S突变的A549细胞的侵袭能力。为了评估2-甲氧基雌二醇在体内的抗转移作用，研究人员将稳定表达荧光素酶基因（A549-Luc）的A549细胞注射到小鼠尾静脉中。小鼠接受2-甲氧基雌二醇治疗，并通过生物发光成像监测癌细胞的肺转移病灶。

　　研究人员在所有小鼠细胞移植后1周内没有检测到任何生物发光信号，但在6或7周后，小鼠出现了明显的生物发光信号，并且接受2-甲氧基雌二醇治疗的小鼠的生物发光信号显著减少。肺部的组织学检查也显示，2-甲氧基雌二醇剂量依赖性地减少了A549-Luc转移结节。2-甲氧基雌二醇治疗剂量依赖性地降低了转移肿瘤中的波形蛋白水平。此外，2-甲氧基雌二醇极大地抑制了表达WT但不是K508R β-连环蛋白的A549细胞的转移和波形蛋白表达。同时，在接受2-甲氧基雌二醇治疗的小鼠中没有观察到明显的毒性。

　　综上所述，研究结果表明，USP13是一个新的KRAS效应因子，并且在KRAS突变的NSCLC组织中特异性上调。突变的KRAS通过转录因子RREB1促进USP13的表达。研究人员证明USP13去除β-连环蛋白的K63-链聚脲化并促进β-连环蛋白/TCF4的结合，从而导致其靶基因的转录，包括波形蛋白和癌转移。因此，靶向USP13将抑制RAS突变肿瘤的转移和进展。